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　　血清干貨分享：胎牛血清使用中會出現(xiàn)哪些問題

　　常見問題：

　　如何儲存和解凍胎牛血清?

　　胎牛血清中為什么會產(chǎn)生絮狀沉淀?如何避免?

　　胎牛血清的熱滅活?

　　細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點(diǎn)該怎么做?

　　小牛血清和胎牛血清有何區(qū)別?

　　1、如何儲存和解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損?

　　將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。

　　長時(shí)間儲存在2-8℃時(shí)，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此，推薦在-20℃以下儲存血清，并避免反復(fù)凍融。

　　我們建議血清應(yīng)保存在-2O℃。若存放于4℃時(shí)，請勿超過一個(gè)月。若一次無法用完一瓶，建議無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。

　　2、血清中包含絮狀沉淀，它們是什么，怎么處理?

　　沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性，不會影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除去沉淀，離心血清(400g，1-2分鐘)或者簡單的讓其沉淀在瓶子底部，將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個(gè)無菌瓶里(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀，因?yàn)槌恋頃氯麨V膜而無法過濾)。大多情況輕輕搖動(dòng)沉淀并加熱至37℃就會再溶解。所以，使用產(chǎn)品時(shí)要搖動(dòng)并加熱血清至37℃，沉淀會自然消失。

　　3、如何避免血清中產(chǎn)生沉淀?

　　按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生：

　　(1)解凍血清時(shí)，請隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。

　　(2) 血清分裝凍存時(shí)，須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一。

　　(3) 勿直接由-20℃直接至37℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。

　　(4) 勿將血清置于37℃太久，否則血清會變得渾濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會因此受到破壞，從而影響血清的品質(zhì)。

　　(5) 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。

　　(6) 若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過高，時(shí)間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。

　　4、培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后，可長期保存嗎?

　　一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時(shí)，您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它。因?yàn)橐恍┛股睾脱逯械幕境煞衷诮鈨龊缶烷_始降解。

　　5、為什么要熱滅活血清?

　　加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在免疫學(xué) 研究，培養(yǎng)ES細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞時(shí)，推薦使用熱滅活血清。

　　6、有必要做熱滅活嗎?

　　實(shí)驗(yàn)顯示，經(jīng)過正確處理的熱滅活血清，對大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn)，或沒有任何作用，甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量，而造成細(xì)胞生長速率的降低。

　　而經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物的形成會顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點(diǎn)"，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會使此沉淀物更增多，使研究者誤認(rèn)為是微生物 的分裂擴(kuò)增。

　　若非必須，可以不需要做熱處理這一步。不但節(jié)省時(shí)間，更確保血清的質(zhì)量!

　　7、細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點(diǎn)是污染嗎?如何處理?

　　一旦您在細(xì)胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點(diǎn)生成，首先，要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁，然后，在鏡下觀察培養(yǎng)細(xì)胞生長的狀態(tài)，黑點(diǎn)是否游動(dòng)。如果細(xì)胞被污染，微生物則會大量繁殖，培養(yǎng)基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細(xì)菌污染、支原體污染等。

　　如果在鏡下觀察細(xì)胞，生長狀態(tài)良好，與黑點(diǎn)出現(xiàn)前相比，沒有任何變化，那么，黑點(diǎn)的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān)：

　　(1)細(xì)胞生長過老，破碎的細(xì)胞殘骸;

　　(2)血清質(zhì)量不好，反復(fù)凍融的結(jié)果;

　　(3)配制培養(yǎng)基的pH值偏高，不宜細(xì)胞生長;

　　(4)配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格。可應(yīng)用離心、過濾的方法去除這些黑點(diǎn);

　　(5)培養(yǎng)原代細(xì)胞中出現(xiàn)小黑點(diǎn)，可能是原代組織中的雜質(zhì)，多次傳代可以消除。

　　8、細(xì)胞培養(yǎng)中如何防止黑點(diǎn)生成?

　　(1) 盡可能地減少血清凍融次數(shù)。

　　(2) 培養(yǎng)基無需37℃水浴。

　　(3) 培養(yǎng)基保持最佳PH值7.0-7.2。

　　(4) 嚴(yán)格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì)，容器定期刷洗。

　　(5) 掌握細(xì)胞傳代的最佳時(shí)機(jī)，細(xì)胞切勿生長過老。

　　9、小牛血清和胎牛血清有何區(qū)別與注意事項(xiàng)?

　　(1)來源不同：胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰懷孕母牛的時(shí)候,通過心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清，新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛。

　　(2)組份與比例不同：兩者所含的促細(xì)胞生長因子、促貼附因子、激素及其他活性物質(zhì)等

　　(3)用途與用法不同：某些細(xì)胞必需胎牛血清才能生長，而有些細(xì)胞只需小牛血清即可，使用濃度不同，一般在5%-10%，有特殊要求的濃度在20%。

　　10、血清保存和使用須注意

　　血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃，若存放在4℃不可超過一個(gè)月。

　　解凍血清時(shí) ，應(yīng)先將血清至于2-8℃冰箱，并經(jīng)常搖勻使之溶解，然后至室溫放置使之升溫，絕對不可將冷凍的血清直接放入37℃水浴或者溫箱中，如放在37℃解凍，顏色加深，粘稠度也會增加，血清在解凍和熱滅活后，應(yīng)按用量分裝并于-20℃保存，避免反復(fù)凍融。

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