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ELISA檢測試劑盒試驗需恪守的中心原理
,的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。
ELISA檢測試劑盒可以用于:(1)檢測大分子抗原和特異性抗體等;(2)具有快速、靈敏、簡便、載體易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點。
ELISA檢測試劑盒實驗中的血清需采用血管收集血液,室溫血液自然凝固30分鐘,1000xg離心15分鐘左右,收集上清,分裝后,標(biāo)好號,-20°C或-80°C保存。運輸是用干冰。
把ELISA檢測試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。對于一個旨在分離CD4陽性T的試劑盒來說,操作流程主要有以下幾步。首先,將樣品與anti-CD4抗體包被的磁珠共同孵育,使抗體與CD4+T結(jié)合。然后洗去不需要的非目標(biāo)(即不表達CD4的),留下磁珠-抗體-復(fù)合物。將上述復(fù)合物與能結(jié)合anti-CD4抗體的二抗一起孵育胞,形成磁珠-抗體-二抗復(fù)合物。我們可以用磁鐵去除這種磁珠-抗體-二抗復(fù)合物,而所有的CD4+細胞留在上清中。最后,只需將上清轉(zhuǎn)移就可以進行下游研究了。
ELISA檢測試劑盒試驗有必要恪守以下3個中心原理:
(1)抗原或抗體能吸附于固相載體表面,并堅持其免疫學(xué)活性;
(2)抗原或抗體可通過共價鍵與酶銜接構(gòu)成酶結(jié)合物,而此種酶結(jié)合物仍能堅持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性;
(3)酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后,可依據(jù)參加底物的色彩反響來斷定是否有免疫反響的存在,并且色彩反響的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的,ELISA檢測試劑盒可依據(jù)已知濃度的抗原或抗體的色彩反響的深淺制作規(guī)范曲線并依此計算出未知樣品中抗體或抗原的濃度。
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